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细胞生物学应该使用哪些显微镜?

时间:2023-02-24 14:54:17 来源: 点击:

  

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  细胞生物学概念

  细胞生物学是以细胞为研究对象,从细胞的显微水平、亚显微能力和分子水平三个层次研究细胞结构、性能和生命历史。显微结构一般是指大致的轮廓、大结构,如线粒体、叶绿体、细胞核等,其分辨率大于0.2μm,可在光学显微镜下观察;亚显微结构是细胞膜、核膜、内质网膜等更具体的结构,其分辨率低于0.2μm,受光学显微镜衍射极限的限制,需要电子显微镜识别,但电子显微镜不适合活细胞成像,许多应用研究只需要确定亚显微物质的分布,不需要明确具体结构,因此一般可以使用宽场荧光显微镜或共聚焦显微镜进行荧光标记。

  显微镜相机MC50-S下的细胞显像

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  显微成像技术在细

  细胞生物学的应用

  细胞生物学主要研究细胞的生命活动,包括生长、发育、繁殖、遗传、变异、衰老、死亡、代谢、调节、分化等。光学显微镜的研究方向如下:①生物膜与细胞器;②细胞信号转导;③细胞骨架系统;④细胞核、染色体和基因表达;⑤细胞增殖及其调节;⑥细胞分化和干细胞;⑦细胞死亡;⑧细胞衰老;⑨细胞工程。

  这些研究都是基于对细胞显微水平和亚显微水平的观察:

  (1)研究细胞的微观形态和活动,如细胞迁移、细胞吞咽、细胞纤毛和鞭毛运动等

  细胞一般是透明的,未染色的标本或活细胞适用于相差观察,如活细胞培养(刮痕试验、转移试验)

  (2)观察细胞亚显微水平的染色和荧光标记

  细胞亚显微结构大小一般小于0.2μm,光学显微镜不能观察其具体结构,但可以利用其结构中的蛋白质或核酸,选择合适的荧光染料,通过荧光显微镜观察光信号,判断物质的分布和活动。

  MF53-N下的细胞有丝分裂

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  细胞中的显微成像技术

  生物学应用中的挑战

  细胞生物学显像有以下几个难点需要注意:

  1)细胞的长期活性和健康需要培养条件的支持。细胞的活性和健康需要适当的温度、湿度和气体培养条件来支持,没有这些条件,细胞就不能长期保持活性。如果观察和测试能在短时间内完成,则在离开培养条件后尽快完成观察和测试。对于需要长期观察的细胞活动,应考虑将成像设备放入培养箱,或将培养皿放在成像设备上,然后使用微流控制细胞芯片分析仪进行调整和维持培养条件。

  (MF53-NMSX2拍摄的细胞划痕实验状态)

  2)不合适的光源可能会损害细胞的活性和健康。高能激发光(如汞灯的紫外线)、高强度光(如共聚焦激光光源)、长期直射会影响细胞的活性和健康,这在传统的汞灯光源中非常明显。使用LED冷光灯的宽场荧光显微镜进行无染色或霍夫曼部署观察是一种低光源损伤的方案。当需要荧光染色时,使用低光毒性的长波段荧光染料(如cy5)、cy5.5、cy7等。),组合光强尽可能低,激起/显像时间尽可能短,也是一种思维方式。

  低光毒性LED光源反映观察

  3)荧光染料可能会损害细胞的健康。荧光染料的毒性和激发光的光毒性会使细胞健康处于不良状态,通常是DAPI和hoechst,这些染料具有一定的毒性,并使用光毒性紫外线激发。在这种情况下,建议染色后尽快进行测试,并尽可能缩短测试时间。

  4)荧光染料组合不当会导致图像不理想。荧光染料不合适或过多会导致光谱重叠和非特异性染色,增强背景信号,影响荧光成像效果。为了防止此类问题,需要合理选择染料的类型和数量,尽量错开发射波段,选择合适的染料滤光片,通常使用窄带发射滤光片会有更好的效果。此外,还可以通过添加适量的背景抑制剂来减少背景光。

  5)荧光成像测试相机的灵敏度。荧光成像属于暗光成像。一般来说,显微镜相机可能存在长时间成像和高背景噪声的问题,拍摄的照片很容易粘贴。使用高灵敏度相机可以减少显像时间、光毒性和背景噪声,这对紫外成像和红外成像更为明显。对于650nm以上的红外波段显像,还需要使用SCMOS研究相机(黑白),去除蓝色玻璃/IRCF。

  6)焦表面漂移,观察目标在实验过程中可能因移动而失焦。具有自动聚焦功能的活细胞成像仪可以帮助您保持更长的目标聚焦时间,减少聚焦漂移。此外,在稳定的温度下培养细胞,保持容器中溶液的体积稳定,也有利于处理聚焦漂移问题

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  (1)典型解决方法:倒置荧光显微镜MF522-NMC500高灵敏显微镜相机-S/MS23

  倒置荧光显微镜可实现相差观察、莹光观察和明场观察

  LED冷光,紫外波段独立控制,光毒性较低

  可个性化选择莹光通道,实现各种莹光信号观测

  可选用高灵敏度相机,弱莹光信号捕捉能力强,显像效果优异

  (2)研究解决方法:电动XYZ倒置荧光显微镜MF533-NMC50高精度相机-SMS23或研究型相机MSH12/MSH05

  研究级倒置荧光显微镜,高品质相映,莹光和明场显像,霍夫曼版本

  触摸屏控制LED冷光,紫外波段独立控制,光毒性较低

  滤光片组可自主选择更换,满足Fura-2钙离子探头等不同荧光染色观察需求

  三轴高精度电动平台,重复定位精度1μm,精确定位和自动对焦

  选择高灵敏度相机来满足荧光成像,选择研究级相机来满足特殊的成像要求,如Cy7染料

  (3)紧凑空间解决方法:活细胞成像仪(自带无线相机)

  高度一体化,支持相映式和明场观察显像

  LED冷光,紫外波段独立控制,光毒性较低

  尺寸小巧轻便,可用于空间狭小细胞房

  电脑平板电脑可以无线连接相机,防止电缆不便

  可选配自动对焦、莹光、双物镜等升级配备

  (4)原产品升级方案:四大品牌显微镜LED光源/模块MC500高精度显微镜相机-S/MS23

  宽光谱大功率LED光源MG-100和四通道光源MG-120可适用于四大品牌的主流荧光显微镜,使用更方便,使用寿命更长,紫外线毒性更低

  高灵敏度相机组合定制接口,可适用于四大品牌主流倒置显微镜和倒置荧光显微镜


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