使用方法:
(1)将材料板放在舞台上。
(2)打开调节器荧光显微镜。然后按下并启动UV灯,不能在近15分钟内点燃,收盘后不能重启3分钟。
(3)将激励滤波器转换为V,将分色器调整为V,选择495或475nm阻塞滤波器。
(4)用uvfl40.uvfl100荧光镜检查。
(5)在载玻片上加入非荧光油,先用40X,再用100X聚焦显微镜检测荧光。
(7)由于紫外线荧光随着时间的推移而增加,照射荧光物质逐渐减弱,视野检查应不断变化。
(8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍显微镜材料(使用低倍显微镜时不添加荧光油)。
荧光图像的记录方法:
荧光显微镜观察到的荧光图像具有形态特征、荧光颜色和亮度。判断结果时,必须结合判断。结果是根据主观指标记录的,即工人的眼睛。作为一般的定性观察,基本上是。随着科学技术的发展,客观指标被用来记录判断结果,如使用细胞分光光度计、图像分析仪等仪器。然而,这些文件记录的结果也必须与主观判断相结合。
荧光显微镜摄影是记录荧光图像的必要条件。由于荧光容易褪色和减弱,有必要记录实时摄影的结果。该方法与普通显微摄影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA200或以上或24。以上。由于紫外线对荧光的猝灭效果很大,如荧光标记物FITC,当紫外线照射30s时,荧光亮度降低50%,因此曝光速度太慢,无法捕捉荧光图像。一般来说,荧光显微镜有半自动或全自动显微摄影系统
注:
(1)荧光显微镜严格按照操作说明书要求制作,不改变程序。
(2)检查应在暗室进行。进入暗室后,打开电源,点燃超高压汞灯5-15分钟。当光源发出强光并稳定下来时,眼睛有效地适应暗室,然后开始观察标本。
(3)调节光源时戴防护眼镜,防止紫外线损伤眼睛。
(4)每次检查时间为1~2小时,超高压汞灯发光强度逐渐降低,荧光降低;紫外线照射3~5分钟后荧光降低。因此,不超过2~3小时。
(5)荧光光学显微镜使用寿命有限,检查应集中在样品上,以节省时间,保护光源。天气热的时候要加冷却风扇,换灯泡的时候要开始新的记录时间。后灯可以点亮,然后熄灭,灯完全冷却。一天几次,避免火源。
(6)染色后,荧光会随着时间的推移而逐渐减弱。当样品在4℃下储存在聚乙烯塑料袋中时,可以延迟荧光衰减时间,防止密封剂蒸发。
(7)荧光亮度的确定标准:一般分为“1”-NO或可见弱荧光四个层次。“++”-只能看到明显的荧光。“(+)+”-可见明亮。